1.细胞复苏
将冷冻细胞从液氮中取出后，在37℃水浴中不断摇动，促进其融化。将融化的细胞移入离心管，加入37oc预热的DMEM完全培养基(其中胎牛血清约10%)，轻轻吹匀，离心，500g离心2min，放弃清液。
添加 DMEM完全培养基清洗，弃上清液。将 DMEM全培养基加入，轻轻吹混，制成细胞悬液，接种于5%CO2的细胞培养盒内，接种于5%CO2培养瓶中。
2.细胞传代
当细胞密度达到80%~90%(过早产量不足，过晚细胞状态不佳，1:2-1:10以上的比例传代培养，一般为1:3-1:5细胞一代，即从细胞接种到分离再培养的一段时间，非细胞有丝分裂的次数)时，除完全培养基，用1Xpbs清洗两次。
添加胰蛋白酶(注:最好用消化液覆盖细胞，最佳消化温度为37oc。显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞。如果细胞回缩，细胞不再连接成片，说明此时细胞消化适度)消化，放入细胞培养箱约2-3分钟。
添加适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移到离心管后500g离心2min，弃清液，再加DMEM完全培养基清洗，弃清液。
添加DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸收10微升进行培养，然后按所需细胞量在5%C后继续培养。
