亨盖特滚管技术可以用在一些有益厌氧菌上,比如在双歧杆菌的分离和活菌培养计数。另外还可以用于腐败菌类和病原菌的分离和鉴定上。
亨盖特Hungate厌氧滚管技术是国外微生物学家亨盖特于1950年明确提出并运用于瘤胃厌氧微生物研究的厌氧培养技术。该技术经历了几十年的不断完善,使亨盖特厌氧技术日益完善,并逐渐发展成为一套完整的厌氧微生物研究技术。数年的实践经验证明,它是一种特别合理的研究严格,专业厌氧菌的技术。
1.铜柱系统除氧。
铜柱是一种里面有铜丝或铜屑的硬玻璃试管。管道尺寸为40-400mm,两段生产加工成漏斗,表面周边有加热带,并与变压器衔接,以操纵电流电压,稳定铜柱的温度。铜柱两面衔接软管,下端衔接气瓶,下端衔接出口。由于N2、CO2、H2等从气瓶中所产生的气体通常带有O2,当这些气体通过约360℃的铜柱时,铜和气体中的微量CO2化合物所产生Cuo,铜柱从明亮的黄色变为黑色。当氧化铜柱进入H2时,H2与Cuo中的氧结合形成H2O,Cuo恢复为铜,铜柱呈明亮的黄色。这种铜柱可以重复使用,并不断发挥除氧的作用。当然,H2源也可以由氢发生器所产生。
5.2培养基培养基和稀释液的制备。
制作预还原培养基和稀释液时,先将准备好的培养基和稀释液煮沸驱氧,然后趁热将半定量加样器装入螺口厌氧试管。一般琼脂培养基装4.5-5ml,稀释液装9ml,插入N2气长针排除O2。这时可以清楚的看到,培养基中添加的氧化还原指示剂叶片天青从蓝到红变成无色,说明试管已经变得无氧,然后用螺丝口覆盖丁烯胶塞和螺丝盖灭菌备用。
5.3制备不一样稀释度的双歧杆菌试品。
在无菌情况下,准确的取1g固体或用无菌注射器获取1ml混合均匀的液体试品,然后添加带有预还原生理盐水的厌氧试管,用冲击器均匀冲击,做成10-1稀释液。用无菌注射器将1ml10-1稀释液获取到另一根带有9ml生理盐水的试管中,做成10-2稀释液。按此操作步骤,将10倍系列稀释至10-7,做成不一样浓度的试品稀释液。滚管培养计数通常选择10-5、10-6和10-7。
5.4厌氧滚管培养法。
把有融化的无菌无氧琼脂培养基试管放在五十摄氏度左右的水中,用无菌注射器吸取三种(10-5、10-6、10-7)稀释度的稀释液融化琼脂培养基螺口厌氧试管里面,再把它平方在有冰块的盘子里,由此带菌的融化培养基就会在试管内壁形成一层薄层。需要把每个稀释度进行重复三次操作,在放到37℃的培养箱里面。经过24小时到48小时后,就可以在螺口厌氧试管的琼脂层内看到菌落。